MR. SC. SANJA MATELJAK LUKAČEVIĆ – OBRANA DOKTORSKOG RADA

Naslov: Utjecaj različitih postupaka pročišćavanja na svojstva terapijskih imunoglobulina G (Influence of different purification protocols on the therapeutic immunoglobulin G properties)

srijeda, 3. studenog 2021. godine u 12,00 sati u predavaonici BO3 Biološkog odsjeka PMF-a, Rooseveltov trg 6

Povjerenstvo za obranu:

Dr. sc. Julija Erhardt, znan. sur., PMF, Zagreb

Dr. sc. Tihana Kurtović, znan. sur., Centar za istraživanje i prijenos znanja u biotehnologiji, Zagreb

Doc. dr. sc. Jasmina Rokov Plavec, PMF, Zagreb

Zamjena: doc. dr. sc.Snježana Židovec Lepej, Klinika za infektivne bolesti "dr. Fran Mihaljević", Zagreb

Mentor: dr. sc. Beata Halassy, znan. savj. Centar za istraživanje i prijenos znanja u biotehnologiji Sveučilišta u  Zagrebu

SAŽETAK

Terapijski imunoglobulini G (IgG-i) aktivna su komponenta antivenoma, biofarmaceutika koji se koriste u liječenju oboljenja uzrokovanih patogenim djelovanjem zmijskih otrova, a dobivaju se različitim metodama izolacije iz hiperimune životinjske plazme. No, iako pročišćeni, IgG-i u određenoj mjeri još uvijek izazivaju nuspojave koje se, između ostalog, pripisuju uvjetima samih proizvodnih postupaka za koje se pretpostavlja da različitim principima različito utječu na sigurnost ovih terapeutika i njihovu kliničku učinkovitost. Cilj rada bio je istražiti utjecaj najčešće primjenjivanih biokemijskih principa izolacije IgG-a iz jedinstvenog uzorka hiperimune konjske plazme na svojstva imunoglobulina koja se smatraju relevantnima i odgovornima za kvalitetu konačnog produkta. Svakim od pet ispitanih postupaka pročišćavanja (taloženje amonijevim sulfatom, taloženje neimunoglobulinskih proteina kaprilnom kiselinom, kromatografija izmjenom aniona i kationa te afinitetna kromatografija pomoću imobiliziranog proteina A) dobiveni su IgG pripravci jedinstvenog sastava obzirom na udio agregata i profil zaostalih nečistoća, čija prisutnost može umanjiti njihovu stabilnost, a time i sigurnost primjene. Pojedini postupci uzrokovali su promjene u sastavu potklasa IgG-a, od kojih je, sa stajališta uloge u neutralizaciji toksičnih učinaka zmijskih otrova, od najvećeg značaja gubitak IgG(T) potklase uzrokovan kromatografijom pomoću imobiliziranog proteina A i kromatografijom izmjene kationa. Uočena je visoka negativna korelaciju između udjela agregata u pripravcima i termičke stabilnosti IgG-a, kao i sklonost daljnoj agregaciji proporcionalna početnom udjelu agregata. Budući da intenzitet i karakter nepovoljnih uvjeta postupaka pročišćavanja utječu na udio agregata u IgG preparatima, time također posredno djeluju i na njihovu stabilnost.